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 技術文章
石蠟免疫組化參考實驗步驟
作者:江蘇鎮江厚普生物科技有限公司  來源:  發表時間:[2011-4-16]  點擊:3194

1. 常規石蠟切片60烤片2小時;

2. 脫蠟。二甲苯脫蠟15min,兩次;

3. 水化。依次用無水乙醇、95%、90%、80%、70%,各一次2min,之后在蒸餾水中孵育5min;

4. PBSpH7.4)浸泡5min;

5. 抗原修復:高壓修復(EDTA,pH8.00.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液,pH6.0高壓10-15min),PBS2-3min;

6. 3% H2O2去離子水37孵育10min,PBS洗;

7. 正常山羊血清封閉,37孵育10-20min,勿洗;

8. 適當比例的一抗工作液孵育,4過夜或37 1h;

9. 復溫20min,PBS3min,三次;

10. 二抗孵育:加生物素化標記二抗,37,10-15min,PBS3min,三次;

11. 三抗孵育:加辣根酶標記的鏈酶卵白素,37,10-15min,PBS3min,三次;

12. DAB顯色劑顯色,鏡下觀察結果,適時終止;

13. 蘇木素復染5min,自來水沖洗片刻,75%的鹽酸酒精溶液分化30s,自來水沖洗5min藍化;

14. 脫水。依次經過70%、80%、90%、95%、無水乙醇,各2min,二甲苯15min,三次;

15. 封片,中性樹膠封片。

光學顯微鏡100×或400×觀察,拍片。

圖象評分。

 

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