會員登陸 / 下載中心
    產品分類
        抗體
   多克隆抗體磷酸化抗體
   二抗單克隆抗體
   免疫血清免疫球蛋白
        酶聯免疫試劑盒
   人ELISA試劑盒大鼠ELISA試劑盒
   小鼠ELISA試劑盒兔ELISA試劑盒
   植物ELISA試劑盒其他種屬
        免疫及細胞生物學試劑
   免疫組化試劑蛋白研究試劑
   細胞培養類細胞凋亡檢測試劑
        生化及分子生物學試劑
   常規生化試劑核酸研究試劑
   PCR相關試劑克隆載體相關試劑
        實驗室耗材和儀器
   進口實驗室耗材國產實驗室耗材
   實驗儀器 
 
    友情連接
 
當前位置:首頁 > 技術文章
 技術文章
免疫熒光參考實驗步驟
作者:江蘇鎮江厚普生物科技有限公司  來源:  發表時間:[2011-11-4]  點擊:4911

一、細胞免疫熒光

1. 細胞爬片;

2. 冷丙酮4固定15min(或用4%多聚甲醛室溫固定10~20min);

3. 空氣干燥5min,PBS漂洗3min,3次;

4. 細胞通透:0.5% Triton X-100(溶于PBS)通透細胞,室溫15~30min(丙酮固定法不用此步驟);

5. PBS漂洗2次,每次5min;

6. 3% H2O2去離子水室溫孵育10min,PBS洗;

7. 正常山羊血清封閉,37孵育10~20min,甩掉封閉液,勿洗;

8. 加適當比例的一抗工作液孵育,4過夜或37 1~2h;

9.  PBS漂洗2次,每次5min;

10. 加入熒光二抗工作液,37,30-60min;

11. PBS漂洗2次,每次5min;

12. DAPI染色2~5min,PBS漂洗2次,每次5min;

13. 抗淬滅封片劑封片;

14. 熒光顯微鏡觀察,拍片。

二、冰凍切片

1. 冰凍切片室溫放置30分鐘后,入4丙酮固定10分鐘,也可根據需要選擇其他方式。PBS洗,5min,3次;

2. 3% H2O2去離子水37孵育10min,PBS洗,5min,2次;

3. 510%正常山羊血清封閉,37孵育10-20min,傾去血清,勿洗;

4. 適當比例的一抗工作液孵育,4過夜或37 12h;

5. 復溫20min,PBS3min,三次;

6. 加入熒光二抗工作液,37,30-60min;

7. PBS漂洗2次,每次5min;

8. DAPI染色2~5min,PBS漂洗2次,每次5min;

9. 抗淬滅封片劑封片;

10. 熒光顯微鏡觀察,拍片。

三、石蠟切片

1. 常規石蠟切片60烤片2小時;

2. 脫蠟。二甲苯脫蠟15min,兩次;

3. 水化。依次用無水乙醇、95%、90%、80%、70%,各一次2min,之后在蒸餾水中孵育5min;

4. 1×PBSpH7.4)浸泡5min;

5. 抗原修復:高壓修復(EDTA,pH8.00.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液,pH6.0高壓10-15min),PBS2-3min;

6. 3% H2O2去離子水37孵育10min,PBS洗;

7. 正常山羊血清封閉,37孵育10-20min,勿洗;

8. 適當比例的一抗工作液孵育,4過夜或37 1h;

9. 復溫20min,PBS3min,三次;

10. 加入熒光二抗工作液,37,30-60min;

11. PBS漂洗2次,每次5min;

12. DAPI染色2~5min,PBS漂洗2次,每次5min;

13. 抗淬滅封片劑封片;

14. 熒光顯微鏡觀察,拍片。

 

網站首頁 | 公司動態 | 產品中心 | 定制服務 | 代理產品 | 技術專欄 | 客戶留言 | 聯系我們

Copyright @ 2011 All Rights Reserved 江蘇鎮江厚普生物科技有限公司 備案/許可證編號為:蘇ICP備11043267號

地址:江蘇省丹陽市呂城工業園 郵編:212300 電子郵箱:[email protected]

訂貨電話:0511-86909515 傳真:0511-86909515 訪問量:10500181   
山西11选5三码遗漏组六 山水云南文山麻将 神机策配资 网络赚钱加入团队 江苏体育彩票七位数 赚钱的网游排行榜 方道配资 欢乐捕鱼人官网 美国股市最新行情 心水一点指什么动物 同花顺炒股软件下载